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2020年3月4日，美国疾控中心等机构的研究人员在bioRxiv上发表论文，描述了从第一个美国新冠肺炎患者体内分离出的病毒，并描述了其基因组序列和复制特性。
研究人员表示，此次疫情传播速度之快前所未有，迫切需要为进一步研究新冠病毒提供参考试剂。
公共卫生界也需要病毒裂解物作为诊断参考，而研究界需要病毒分离物测试抗病毒化合物、开发新疫苗和进行基础研究。

 （注意：预印本网站bioRxiv所有论文未经同行评议）

自新冠肺炎疫情暴发以来，美国第一例患者于1月20日被华盛顿州和美国疾控中心确诊。

研究人员从该患者鼻咽（NP）和口咽（OP）标本中分离出病毒，并对病毒序列、复制特性和细胞培养向性进行了表征。

研究人员于1月22日将阳性标本重新制作和冷冻，然后接种到细胞培养皿中。

2天后，研究人员观察到细胞病变效应（CPE），并在3天后收集到病毒裂解液。

50μl首次提取的病毒裂解物被用于新冠病毒核酸测试，能检测新冠病毒的离析。

研究人员还用检测了提取物中是否存在另外33种不同的呼吸道病毒和细菌病原体，未发现其他病原体。

此外，薄切片电子显微镜也支持鉴定。研究人员还观察了冠状病毒的形态和形态发生特征。

 

接种后3天vero单分子层图像

 

研究人员测序了从第一代OP和NP标本中分离出的病毒，结果显示完全匹配。

并且，研究人员在没有胰蛋白酶的情况下传代了这种病毒。

而且，在缺乏胰蛋白酶的情况下，新冠病毒在VeroCCL81细胞和Vero E6细胞中复制到高滴度。

研究人员在VeroE6细胞（另一种恒河猴胎儿肾脏细胞系）上产生了第四代新冠病毒。

RNA测序显示，其与原始序列相比无核苷酸突变。

SARS-CoV和MERS-CoV也分别在VeroE6和VeroCCL81细胞上生长良好。

经过一系列的稀释感染后，研究人员还发现新冠病毒在两种Vero细胞中都有复制，然而，VeroE6细胞的病毒滴度略高于Vero CCL81。

此外，斑块在Vero E6上更加清晰可见（如图）。

早在接种后2天，VeroE6细胞就产生了明显的斑块，并可见中性红染色。

相比之下，Vero CCL81产生的斑块较少。

研究人员已将病毒分离物存入两个病毒试剂库，BEI资源和世界新兴病毒和虫媒病毒参考中心，以便公众卫生和研究界能够广泛获得该病毒及相关信息。

相关论文信息：https://doi.org/10.1101/2020.03.02.972935

聚焦武汉新型冠状病毒肺炎疫情


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